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蘆薈組織培養(yǎng)快速繁殖技術(shù)
發(fā)布日期：2010-07-16
一、材料和培養(yǎng)基 l0-l5cm 高的蘆薈幼苗 ; 愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基為 MS+(1 一 6mg/
L)BA+(0.1 一 0.5mg/L)NAA; 分化培養(yǎng)基為 MS+(2-4mg/L)BA+(0.1-0.5mg/L)NAA; 生根培養(yǎng)基為 MS+(0.1 一 0.5mg/L)IBA+(2 一 5mg/L)PP33 。
二、繁殖方法
( 一 ) 愈傷組織培養(yǎng) 將準(zhǔn)備好的蘆薈幼苗在清水中沖洗數(shù)次，剪去葉片和大部分莖段，取莖尖部分，再?zèng)_洗 1-2 次，淋干。在超凈臺(tái)上，先用 75% 的乙醇將莖尖浸泡 30-60s ，再用升汞浸 5-l0min ，較后用無(wú)菌水沖洗數(shù)次。用解剖刀取出包括莖尖生長(zhǎng)點(diǎn)的組織切塊，接種到愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基上。培養(yǎng)條件為 : 每天光照 10-12h ，光照度為 1000 一 2000Lx ，溫度 (25 士 )2 ℃。大約 15-25d 后，試管中接種的外植體就可以膨大，形成愈傷組織。愈傷組織的形成標(biāo)志著接種的外植體的生長(zhǎng)狀態(tài)已脫離分化狀態(tài)，開(kāi)始重新恢復(fù)分生能力。愈傷組織形成 1 周后，就可將愈傷組織轉(zhuǎn)管進(jìn)行繼代培養(yǎng)或分化培養(yǎng)。
( 二 ) 繼代培養(yǎng) 將愈傷組織在無(wú)菌條件下，從試管中取出，用鑷子和解剖刀剔除附著在愈傷塊上的培養(yǎng)基，并用無(wú)茵水反復(fù)清洗數(shù)次，直至愈傷塊上無(wú)殘留培養(yǎng)基為止。用解剖刀將愈傷塊切成數(shù)個(gè)小塊，再接種到裝有愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基的三角瓶中，在與誘導(dǎo)愈傷組織相同的培養(yǎng)條件下繼續(xù)培養(yǎng)。幾天后，三角瓶中的小愈傷塊即可逐漸長(zhǎng)大，這一過(guò)程稱作繼代培養(yǎng)，可反復(fù)操作。通過(guò)愈傷組織的繼代培養(yǎng)，原來(lái)接種的 1 個(gè)蘆薈莖尖組織可繁殖出大量的新接種材料來(lái)，用于分化培養(yǎng)。
( 三 ) 分化培養(yǎng) 將愈傷組織在無(wú)菌條件下，從試管或三角瓶中取出，用無(wú)菌水洗凈，切成小接種塊，接種到裝有分化培養(yǎng)基的三角瓶中，分化培養(yǎng)的條件同愈傷組織培養(yǎng)。大約 30-50d 后，愈傷組織就可分化出芽，并繼續(xù)長(zhǎng)出小葉片。當(dāng)分化出的幼苗長(zhǎng)到一定高度或分化出一定數(shù)量后，將這些小幼苗在無(wú)菌條件下取出，進(jìn)行生根培養(yǎng)或重新誘導(dǎo)分化。
( 四 ) 生根培養(yǎng) 當(dāng)三角瓶中的幼苗葉片長(zhǎng)到 3cm 左右時(shí)，將幼苗在無(wú)菌條件下取出，放入裝有生根培養(yǎng)基的三角瓶中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件同分化培養(yǎng)。大約半個(gè)月后，幼苗即可生根。
( 五 ) 煉苗 當(dāng)幼苗的根長(zhǎng)到一 定長(zhǎng)度，幼苗形體已顯健壯時(shí)。將幼苗取出，在清水中洗除附著在根上的培養(yǎng)基 ( 注意 : 一定要嚴(yán)格洗凈，否則會(huì)爛根 ) 。將洗凈的幼苗排好，用清水噴濕，在 15-25 ℃、濕度 60%-80% 的條件下煉苗 24h ，也可視情況縮短為 l2h 。
( 六 ) 移栽 煉苗后，將幼苗移栽入由蛭石組成的馴化苗圃中馴化，每天定期給幼苗噴施馴化培養(yǎng)液和清水，大約 15-20d 后，視幼苗長(zhǎng)勢(shì)，即可移栽到苗圃中。
三、注意事項(xiàng)
1 、配制培養(yǎng)基時(shí)，要嚴(yán)格精確地稱取各種化學(xué)試劑。培養(yǎng)基中的蔗糖可用市售白糖來(lái)替代，從而降低成本。高壓滅菌條件為 120 ℃， 1.5kg/cm 2 ， 3Omin 。每次接種前都要對(duì)接種室進(jìn)行甲醛熏蒸和紫外線滅菌。
2 、在培養(yǎng)中，如果出現(xiàn)雜菌污染，應(yīng)立即將該污染試管或三角瓶中的培養(yǎng)物倒掉并將試管或三角瓶洗凈，烘干備用。對(duì)于愈傷組織或試管苗長(zhǎng)勢(shì)良好，僅有局部雜菌污染的試管或三角瓶，也可在無(wú)菌條件下，將愈傷組織或試管苗取出，重新放入裝有相應(yīng)培養(yǎng)基的試管或三角瓶中，繼續(xù)培養(yǎng)。
3 、煉苗后，也可先將試管苗浸泡在溶解有生根粉的清水中 1-2h ，再移栽到馴化苗圃中。在馴化過(guò)程中，除要注意環(huán)境濕度、溫度和光照外，還要注意防止各種病蟲害的發(fā)生。蘆薈的蟲害主要是紅蜘蛛和蚜蟲，可噴施 40% 的氧化樂(lè)果乳油 1200 倍液防治。蘆薈的病害主要是黑斑病，可噴施 50% 多菌靈可濕性粉劑 1000 倍液防治。 （記者 佚名）
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