孫煥波(個(gè)體經(jīng)營(yíng)）

毛白楊屬楊柳科楊屬，是我國(guó)特有樹(shù)種，樹(shù)干通直，高大，適應(yīng)性強(qiáng)，生長(zhǎng)快，是用材林和城鄉(xiāng)綠化的優(yōu)良樹(shù)種，其優(yōu)株的無(wú)性系苗木，生長(zhǎng)速度比普通毛白楊快15%～20%，經(jīng)濟(jì)價(jià)值更高。但用常規(guī)無(wú)性繁殖時(shí)，如扦插、壓條等，很難生根，加之繁殖材料有限，不僅用材多，費(fèi)工費(fèi)時(shí)，而且成活率低，繁殖系數(shù)不大，很難在短期內(nèi)繁殖大量苗木。試管快繁對(duì)于毛白楊來(lái)說(shuō)，無(wú)論在理論上和生產(chǎn)實(shí)踐上均具有重要的意義。目前，毛白楊的試管快繁技術(shù)已在造林育苗的生產(chǎn)實(shí)踐中推廣應(yīng)用。我們用植物組織培養(yǎng)法進(jìn)行毛白楊的快速繁殖，在短時(shí)間內(nèi)收到了良好的效果。
1外植體的選擇與滅菌
1.1外植體脫毒
選擇品種優(yōu)良、健壯的植株進(jìn)行盆栽，溫度逐漸提高到35～38℃。在這溫度下培養(yǎng)2個(gè)月，這期間要注意肥水的管理，以減輕高溫處理造成的死苗現(xiàn)象。剝?nèi)∏o尖和腋芽。切取頂芽或腋芽3cm左右大小，去掉葉片，保留護(hù)嫩葉柄。用清水反復(fù)沖洗干凈。用70%的灑精浸10s，用無(wú)菌水沖洗3次。0.1%氯化汞浸5min倒出后用無(wú)菌水沖洗3～5次。取出用濾紙進(jìn)行吸干。在解剖鏡下，將材料置于無(wú)菌的濾紙上，剝嫩苞葉，露出錐形體，切取0.5mm長(zhǎng)度的莖尖，帶有2個(gè)葉原基，迅速接種到培養(yǎng)基上，防止莖尖脫水再要注意的一點(diǎn)是不要倒置。
莖尖剝離的大小是脫毒效果的關(guān)鍵技術(shù)。莖尖剝離越小，脫除病毒的效果越好，但接種不易成活；莖尖剝離得越大，接種成活越高，但脫除病毒的效果差。結(jié)合熱處理進(jìn)行莖尖培養(yǎng)，操作簡(jiǎn)便，容易掌握，脫除病毒的效果好。
1.2休眠芽的外植體的選擇與滅菌
毛白楊在初代培養(yǎng)時(shí)也可以采用休眠芽作為外植體，取當(dāng)年形成的直徑在5mm左右健康無(wú)病蟲(chóng)害的枝條，用解剖刀切成長(zhǎng)度為1.5～2.0cm的節(jié)段，每個(gè)節(jié)段帶休眠芽。
將切段先用自來(lái)水沖洗干凈，再用70%～75%酒精浸泡30s同時(shí)不斷用玻璃棒攪動(dòng)，目的是能夠使外植體的表面能夠充分與酒精接觸進(jìn)行消毒。倒掉酒精后，立即用無(wú)菌水沖洗3～5遍，沖洗去殘留的酒精。然后用5%的次氯酸鈉溶液或用0.1%氯化汞溶液進(jìn)行浸泡7～8min，倒掉這些消毒液，再用無(wú)菌水沖洗3～5遍。在無(wú)菌操作臺(tái)上將外植體取出放在已滅好菌的濾紙上吸去殘留的水分，放在另一張已滅菌的濾紙上進(jìn)行切割成帶有1個(gè)葉芽的莖段。
1.3葉片外植體的選擇與滅菌
毛白楊在初代培養(yǎng)時(shí)也可以采用葉片做為外植體。
將葉片先用自來(lái)水沖洗干凈，再用70%～75%酒精浸泡10s同時(shí)不斷用玻璃棒攪動(dòng)，目的是能夠使外植體的表面能夠充分與酒精接觸進(jìn)行消毒。倒掉酒精后，立即用無(wú)菌水沖洗3～5遍，沖洗去殘留的酒精。然后用5%的次氯酸鈉溶液或用0.1%氯化汞溶液進(jìn)行浸泡7～8min，倒掉這些消毒液，再用無(wú)菌水沖洗3～5遍。在無(wú)菌操作臺(tái)上將外植體取出放在已滅好菌的濾紙上吸去殘留的水分，放在另一張已滅菌的濾紙上將葉片切成5mm×5mm。
2外植體的接種
2.1操作人員需著經(jīng)滅菌物白色工作服，戴口罩。進(jìn)行人接種室前，工作人員的雙手必須進(jìn)行滅菌，用肥皂水充分洗滌，操作前再用70%的酒精擦洗雙手。
2.2操作期間經(jīng)常用70%的酒精擦拭雙手和臺(tái)面。特別注意防止“雙重傳遞”的污染。
2.3在打開(kāi)培養(yǎng)瓶、三角瓶或試管時(shí)，較大的污染危險(xiǎn)是管口邊沿沾染的微生物落入管內(nèi)。解決這個(gè)問(wèn)題，可在打開(kāi)前用火焰燒瓶口。
2.4工具用后及時(shí)滅菌，避免交叉污染。
2.5由于空氣中有灰塵，因此在操作時(shí)，仍要注意避免灰塵的落入。盡量把蓋子蓋好，當(dāng)打開(kāi)瓶子或試管時(shí)，應(yīng)在酒精燈前與水平面成45°角，右手將已切割好的外植體用鑷子放在培養(yǎng)基中（但是外植體不夾的過(guò)緊或過(guò)松），之后將瓶蓋在火焰上燒一下蓋上即可。
3培養(yǎng)基的成分
預(yù)培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基的成分是：MS＋0.5mg/LBA＋100mg/L水解乳蛋白，經(jīng)1周的觀(guān)察將沒(méi)有被污染的外植體轉(zhuǎn)接正式誘導(dǎo)分化的培養(yǎng)基：MS＋0.5mg/LKT＋0.02mg/LNAA＋100mg/L賴(lài)氨酸＋3%蔗糖。培養(yǎng)室的溫度在25～27℃，日光燈連續(xù)照射16h，光強(qiáng)為15001x左右；經(jīng)1個(gè)月培養(yǎng)莖段（莖尖大約在2～3個(gè)月）可以分化出芽，愈傷培養(yǎng)基：MS＋0.2mg/LBA＋0.02mg/LNAA＋100mg/L將葉片放在愈傷培養(yǎng)基上進(jìn)行愈傷的誘導(dǎo)，產(chǎn)生后將其愈傷組織放在分化培養(yǎng)基上進(jìn)行分化培養(yǎng)。壯苗培養(yǎng)基為：1/2MS＋1.5%蔗糖；兩周左右培養(yǎng)，即可長(zhǎng)成帶有4～5個(gè)葉健壯的無(wú)根小植株。生根培養(yǎng)基為：1/2MS＋0.2mg/LIBA＋0.02mg/LNAA＋3%活性炭＋1.5%蔗糖；12h的光照與黑暗交替；光強(qiáng)為1500lx經(jīng)1個(gè)月左右培養(yǎng)，即可長(zhǎng)成帶有6～7個(gè)葉健壯完整小植株。
4擴(kuò)大繁殖
4.1莖切段生芽擴(kuò)大繁殖法
將由莖尖（莖段）誘導(dǎo)出的幼芽從基部切下，轉(zhuǎn)接到新配制的壯苗培養(yǎng)基上。壯苗培養(yǎng)基為1/2MS＋1.5%蔗糖。經(jīng)1個(gè)月左右培養(yǎng)，即可長(zhǎng)成帶有4～5個(gè)葉健壯的小植株。將小苗進(jìn)行切割成帶有葉的莖段再次分別插入分化培養(yǎng)基中如此反復(fù)循環(huán)即可獲得大批的無(wú)根苗。這時(shí)將這些無(wú)根苗分別插入生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根。
4.2葉切塊生芽擴(kuò)大繁殖法
每片葉從基部中脈處切取1cm×1cm并帶有約0.5cm長(zhǎng)葉柄的葉切塊，轉(zhuǎn)接到分化培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，注意的是要將葉的被面貼在培養(yǎng)基上�？蓮娜~柄的切口處觀(guān)察到有芽出現(xiàn)。之后逐漸增多成簇。每個(gè)葉切塊可得20余個(gè)叢芽。將這些芽切下，轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中可得到完整的小植株。
5誘芽的影響因素
5.1不同無(wú)機(jī)鹽濃度的影響
不同無(wú)機(jī)鹽濃度的對(duì)比試驗(yàn)，采用MS和1/2MS大量元素兩種濃度。對(duì)比結(jié)果，以高濃度的無(wú)機(jī)鹽對(duì)誘芽的效果為好，在低鹽濃度的培養(yǎng)基上芽的誘導(dǎo)率幾乎減少一半。
5.2不同激素水平的影響
進(jìn)行了3種激素水平的對(duì)比試驗(yàn)，KT用量全同，只NAA的用量不同。從添加NAA0.002mg/L處理看，誘芽率皆低，只NAA的用量加大到NAA0.02mg/L時(shí)，則表現(xiàn)較好，當(dāng)NAA0.1mg/L時(shí)則誘芽率又都有下降的趨勢(shì)。
5.3不同培養(yǎng)瓶的誘芽情況
從100ml三角瓶和500ml廣口瓶的誘芽對(duì)比試驗(yàn)看，經(jīng)1個(gè)月培養(yǎng)，廣口瓶誘芽情況大大優(yōu)于三角瓶，芽數(shù)幾乎多1倍。
5.4不同途徑培養(yǎng)對(duì)比
以0.5mm長(zhǎng)的莖尖培養(yǎng)得到大量正常的植株，在添加一些生長(zhǎng)素等物質(zhì)。表面具有分生能力的愈傷組織，重復(fù)繼代培養(yǎng)仍可保持植株再生能力。大大超過(guò)傳統(tǒng)的方法，且比用誘導(dǎo)側(cè)芽的方法也高得多。
6移栽與管理
6.1嫩莖試管生根
切取3cm左右試管苗無(wú)根嫩莖，轉(zhuǎn)插到1/2MS＋NAA（IBA）0.1～0.5mg/L培養(yǎng)基上，經(jīng)7～10d即可達(dá)到生根率80%，12d生根率可達(dá)100%。在無(wú)植物生長(zhǎng)物質(zhì)的培養(yǎng)基上，生根率90%～100%。
6.2無(wú)根嫩莖的扦插
將試管苗無(wú)根嫩莖切段，直接扦插到介質(zhì)中生根。切段基部經(jīng)生根粉處理，2周后生根率達(dá)90%。免去試管生根的這一環(huán)節(jié)，降低了成本，縮短生產(chǎn)時(shí)間，提高了生產(chǎn)效率。
試管苗生根后，連瓶苗一起放入室，以適應(yīng)光照和溫濕度。3～5d后，打開(kāi)瓶口取出試管苗，按一定株行距置于細(xì)砂或粗蛭石介質(zhì)中，加蓋拱棚覆膜保持溫度和濕度。5d后逐漸揭膜見(jiàn)光，及時(shí)通風(fēng)換氣，定期噴肥和噴藥，防止有菌類(lèi)的污染，提高試管苗的成活率。